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如何區(qū)分各種PCR技術

更新時間:2024-01-19點擊次數:952
  如何區(qū)分各種PCR技術?
  PCR是聚合酶鏈式反應(Polymerase Chain Reaction)的簡稱,是一種體外擴增特定DNA片段的分子生物學技術,PCR技術有很多,那么我們該如何區(qū)分各種PCR技術呢?讓我們一起來看看吧!
  一、普通PCR
  普通PCR即一代PCR,使用普通PCR擴增儀擴增靶基因,并通過瓊脂糖凝膠電泳對產物進行定性分析。
  二、實時熒光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qPCR)
  實時熒光定量PCR,也叫Real-Time PCR,即二代PCR,是指在PCR擴增反應體系中加入熒光染料或者熒光基團,在整個PCR過程中通過收集熒光信號實時監(jiān)測每一個循環(huán)中擴增產物量的變化,最后通過標準曲線和CT值對待測樣品進行定量分析。qPCR常用的有兩種方法:SYBR Green法和TaqMan探針法。
  三、數字PCR
  數字PCR即三代PCR,是對原始PCR的另一種改進,是一種能夠實現核酸絕對定量的精準檢測技術,基于泊松分布原理將核酸樣品分配到大量獨立、平行的微反應單元(納升級)中,使每個反應室中平均只有一個拷貝或者沒有目標DNA分子,然后加入熒光信號進行擴增,從而實現靶標核酸分子的絕對計數,提高檢測靈敏度和準確度。
  四、逆轉錄PCR(Reverse T ranscription-PCR,RT-PCR)
  逆轉錄PCR也叫反轉錄PCR,將RNA的反轉錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈式擴增相結合,是PCR的一種廣泛應用的變形。在RT-PCR中首先經反轉錄酶將一條單鏈RNA逆轉錄成cDNA,再以cDNA為模板,擴增合成目的片段。作為模板的RNA可以是總RNA、mRNA或體外轉錄的RNA產物。無論使用何種RNA,關鍵是確保RNA中無RNA酶和基因組DNA的污染。RT-PCR技術靈敏且應用廣泛,可用于檢測細胞中基因表達水平,細胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列。一般通過一步法或兩步法進行,一步法是RT反應和PCR反應在同一試管中進行;而在兩步法中兩個反應是分開依次進行的。
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